（1）稀释保护液的配制（标准配方）:

液：10克乳糖加双重蒸馏水80毫升、新鲜脱脂牛奶（用离心法取得）20毫升。取本溶液80毫升，再加卵黄20毫升、青霉素10万单位、链霉素100毫克。

第二液：取液45毫升，加葡萄糖3克、甘油5毫升。

所用的稀释溶液（卵黄除外）需过滤并经水浴煮沸消毒（甘油单独水浴消毒），冷却至30C再加卵黄和抗生素。

（2）稀释：采用两次稀释法。先以液将精液稀释至终稀释浓度的一半，裹以8层纱布，置于3～4C冰箱或广口保温冰瓶内预冷1～2小时，再用与液等量的第2液稀释。两次稀释均须在等温（稀释液与精液）下完成。稀释比例一般为2～3倍。

（3）冷冻：先将液氮注入12磅广口保温瓶内，随后置冷冻器（由泡沫塑料及120目铜纱网制成），铜网面应低于保温瓶口2～3厘米，用低温温度计测试温度，随时调整铜网与液氮 面之间的距离，确保铜网面温度恒定于一80—一100C。用滴管吸取混匀后的精液，按每粒0．l毫升滴冻。精液宜分批冷冻，每批制作80～100枚颗粒为好。随即盖好保温瓶盖，停留4～5分钟，浸入液氮，用小勺收取颗粒。下一批冷冻前，需用纱布将铜网面擦拭于净，防止颗粒粘网，不好收取。

将制作好的颗粒精液浸入液氮中贮存备用。